Merck
CN
主页应用蛋白生物学Western Blotting

Western Blotting

免疫印迹实验室。蛋白质免疫印迹检测技术

免疫印迹是一种检测、分析和定量蛋白质的成熟分析技术，已被广泛用于在组织匀浆和细胞裂解液等复杂样品中检测特定的蛋白质分子。该技术通常会涉及通过凝胶电泳进行蛋白分离，然后将其转印到聚偏二氟乙烯（PVDF）或硝酸纤维素膜上。完成蛋白转印后，可对其进行染色观察并通过N端测序、质谱或免疫检测进行直接鉴定。

在免疫印迹检测中，通过蛋白质与特异性抗体的结合来鉴定蛋白质。通常，在使用适当底物进行的化学发光或比色检测中，会联合使用一抗与偶联了HRP或AP的二抗。此外，也可使用荧光标记的一抗或二抗进行直接观察。

免疫印迹已被广泛用于在生物化学领域检测特定蛋白的存在、确定翻译后修饰的程度、验证克隆应用中的蛋白表达、分析蛋白和生物标志物的表达水平、用于抗体表位定位以及检测临床环境中的疾病标志物。

随着对使用有限样品同时分析更多蛋白的需求不断提升，现有研究开始倾向于提升印迹技术的灵敏度和速度。例如，双重印迹可消除由非特异性相互作用引起的假阳性，Far-Western blotting可实现特异性蛋白间相互作用的检测，Southwestern blotting可用于鉴定与特异性DNA序列相互作用的蛋白，多次剥离印迹可提高通量并将印迹间的变异性降至最低。同时，其他新技术也在不断开发，以期减少产生信号所需的蛋白量并提高免疫印迹的定量能力。

相关技术文章

  • 抗体基础知识
    抗体基础知识技术支持，包括抗体基本结构、类型和正常免疫球蛋白系列。
  • 碱性磷酸酶
    我们提供了广泛碱性磷酸酶和底物，可针对您独特的应用需求优化与抗体和其他蛋白质的结合。
  • Loading controls for western blotting
    Loading controls in western blotting application.
  • Gelatine
    Gelatin is a heterogeneous mixture of water-soluble proteins extracted by boiling skin, tendons, ligaments, bones, etc. in the water.
  • Semi-Dry or Tank Electrotransfer Troubleshooting
    The possible causes and potential remedies for poor or inconsistent transfer of proteins from a gel to the Western blot membrane. Optimal transfer conditions may vary depending on the molecular weight of the protein of interest.
  • 查看完整内容

相关实验方案

工作流程

Cell lysis of proteins for Western blotting.

蛋白提取

When working with cells or tissues, samples must be disrupted to isolate the proteins prior to analysis. Lysis and extraction buffers use detergents to break down cell walls and membranes to release the proteins. The optimal buffer should be chosen based on the sample type and sub-cellular localization of the target protein.

Gel electrophoresis chamber for running protein gels.

Protein gel electrophoresis is used to separate and resolve proteins prior to blotting. The prepared protein mixture is run on a polyacrylamide gel to sort proteins by molecular weight and charge.

Transfer of proteins to PVDF membrane for detection using Western blotting techniques.

The proteins separated on the gel by electrophoresis are immobilized by transfer onto a PVDF or nitrocellulose membrane. The transfer uses electric current to pull proteins from the gel onto the membrane (electroblotting).

Western blotting Detection of target protein using primary and HRP-conjugated secondary antibody with substrate.

Target protein is detected using a primary antibody in combination with an HRP- or AP-conjugated secondary antibody and an appropriate chemiluminescent or colorimetric substrate, or by using fluorescently-labeled primary or secondary antibody.

相关应用
蛋白质凝胶电泳_蛋白质分离技术_二维凝胶电泳-默克生命科学
蛋白质凝胶电泳可用于分离蛋白质，进而纯化、鉴定和检测蛋白质。通过PAGE、SDS-PAGE、2D PAGE和等电聚焦电泳(IEF)等方法，可为蛋白质免疫印迹、质谱法和蛋白组学分析等下游应用分离所需的蛋白质。
蛋白提取_细胞裂解_蛋白质生物学-默克生命科学
细胞裂解和蛋白质溶解是进行有效分析和高效处理的关键步骤，默克分享提取方法包括酶法、化学法、机械法或几种方法的联合使用。
酶联免疫吸附测定_ELISA检测法_ELISA试剂盒-默克生命科学
酶联免疫吸附检测(ELISA)分为直接、间接和捕获（夹心）三种检测法来鉴定和定量特异抗原。
流式细胞术_流式细胞仪及试剂_蛋白质生物学-默克生命科学
流式细胞术是一种强大的分子和细胞生物学工具，可对单个细胞进行多参数分析。
蛋白质谱
在药物发现和蛋白质组学研究中，可用于蛋白质鉴定和定量、翻译后修饰、聚糖谱分析以及蛋白-蛋白相互作用的蛋白质质谱技术概述。
蛋白表达_重组蛋白_蛋白质生物学-默克生命科学
蛋白表达技术，可在大肠杆菌、昆虫、酵母和哺乳动物的表达系统中表达重组蛋白，用于基础研究、研发治疗方法及协助疫苗生产。
蛋白定量
蛋白定量方法、试剂和免疫测定技术可准确测定各类样品中的蛋白浓度。
相关产品类别
转印膜和试剂盒
根据目标蛋白的大小、应用、检测方法和便利性，您可选用多种Immobilon®PVDF膜，以获得理想的的蛋白质印迹和蛋白质免疫印迹性能。
检测底物和酶
底物和酶在生命科学研究中至关重要，可同时用作检测系统中的工具和靶标。通过我们多样的检测底物和酶产品线，探索用于ELISA、免疫组织化学、蛋白质印迹等酶法蛋白质检测系统。
蛋白质电泳凝胶和缓冲液
预制聚丙烯酰胺蛋白质凝胶、电泳缓冲液和用于手工灌注丙烯酰胺凝胶的手动灌胶试剂（用于PAGE和SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳）。
蛋白凝胶电泳和转印设备 | Sigma-Aldrich
蛋白凝胶电泳和湿法/半干法转印电泳槽、转印系统和电源。
蛋白质标准品
用于蛋白凝胶电泳、SDS-PAGE和蛋白免疫印迹应用的预染和未染色分子量标准品。
蛋白电泳凝胶染液
适用于聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、PVDF和硝酸纤维素膜的高灵敏度比色和荧光蛋白凝胶染液、固定液和脱色试剂。
膜免疫检测装置
使用免疫检测仪进行蛋白质免疫印迹封闭、抗体结合和洗涤，简化您的蛋白质免疫印迹工作流程并节省时间。
Milli-Q®台式纯水系统_实验室用水_超纯水系统-默克生命科学
查找满足您实验室需求的纯水系统。紧凑型Milli-Q®纯水和超纯水台式纯水系统可满足您的应用、质量、容量、空间和预算要求。
登录以继续。

如要继续阅读，请登录或创建帐户。

暂无帐户？