usage
sufficient for 10 purifications
Quality Level
technique(s)
RNA purification: suitable
storage temp.
15-25°C
General description
GenElute™ Direct mRNA Miniprep试剂盒提供了一种方便的格式，可直接从哺乳动物细胞和组织中分离聚腺苷化mRNA。直接mRNA分离程序是基于Badley的方法。 多达107个哺乳动物细胞或40毫克组织经溶解和搅匀，借助过滤柱或
机械高速搅拌器。在10分钟的蛋白酶K消化过程中，RNase被消除。 加入氯化钠，在10分钟的孵育期间，聚腺苷化RNA被捕获在寡聚(dT)聚苯乙烯珠上。为了进一步富集，RNA可以从珠粒释放到新鲜裂解液中，然后用原始珠粒重新捕获。在旋转柱中洗涤3次后，用100 μl of 10 mM Tris-HCl，pH 7.4洗脱纯化的mRNA。
机械高速搅拌器。在10分钟的蛋白酶K消化过程中，RNase被消除。 加入氯化钠，在10分钟的孵育期间，聚腺苷化RNA被捕获在寡聚(dT)聚苯乙烯珠上。为了进一步富集，RNA可以从珠粒释放到新鲜裂解液中，然后用原始珠粒重新捕获。在旋转柱中洗涤3次后，用100 μl of 10 mM Tris-HCl，pH 7.4洗脱纯化的mRNA。
cDNA合成、表达谱分析等程序需要从大量的rRNA和tRNA中分离mRNA。GenElute mRNA试剂盒提供了简便程序，用于从之前制备的总RNA或直接从哺乳动物细胞和组织中分离聚腺苷化mRNA。
直接制备mRNA是通过SDS/蛋白酶K消化破坏细胞或组织，释放RNA并消除rnase。该试剂盒使用寡聚物(dT)共价连接到1 μm聚苯乙烯珠，通过杂交捕获聚腺苷化mRNA。聚苯乙烯颗粒在杂交过程中保持悬浮状态，不需要像纤维素或磁性颗粒那样混合或摇摆。选择聚苯乙烯也是因为在更宽松的洗涤步骤下，低聚物(dT)聚苯乙烯珠比更常用的低聚物(dT)纤维素（2或3个洗涤步骤，而不是10个或更多）产生更清洁的mRNA。使用GenElute试剂盒，mRNA-珠复合物在微离心机旋转过滤器上洗涤，并洗脱到10 mM Tris-HCL中，pH 7.5。
多达107个哺乳动物细胞或40毫克组织经溶解和搅匀，借助过滤柱或机械高速搅拌器。在10分钟的蛋白酶K消化过程中，RNase被消除。 加入氯化钠，在10分钟的孵育期间，聚腺苷化RNA被捕获在寡聚(dT)聚苯乙烯珠上。为了进一步富集，RNA可以从珠粒释放到新鲜裂解液中，然后用原始珠粒重新捕获。在旋转柱中洗涤3次后，用100 μL的10 mM Tris-HCl，pH 7.4洗脱纯化的mRNA。
纯化后的mRNA可用于Northern分析、逆转录和PCR、阵列标记和其他常见应用。
直接制备mRNA是通过SDS/蛋白酶K消化破坏细胞或组织，释放RNA并消除rnase。该试剂盒使用寡聚物(dT)共价连接到1 μm聚苯乙烯珠，通过杂交捕获聚腺苷化mRNA。聚苯乙烯颗粒在杂交过程中保持悬浮状态，不需要像纤维素或磁性颗粒那样混合或摇摆。选择聚苯乙烯也是因为在更宽松的洗涤步骤下，低聚物(dT)聚苯乙烯珠比更常用的低聚物(dT)纤维素（2或3个洗涤步骤，而不是10个或更多）产生更清洁的mRNA。使用GenElute试剂盒，mRNA-珠复合物在微离心机旋转过滤器上洗涤，并洗脱到10 mM Tris-HCL中，pH 7.5。
多达107个哺乳动物细胞或40毫克组织经溶解和搅匀，借助过滤柱或机械高速搅拌器。在10分钟的蛋白酶K消化过程中，RNase被消除。 加入氯化钠，在10分钟的孵育期间，聚腺苷化RNA被捕获在寡聚(dT)聚苯乙烯珠上。为了进一步富集，RNA可以从珠粒释放到新鲜裂解液中，然后用原始珠粒重新捕获。在旋转柱中洗涤3次后，用100 μL的10 mM Tris-HCl，pH 7.4洗脱纯化的mRNA。
纯化后的mRNA可用于Northern分析、逆转录和PCR、阵列标记和其他常见应用。
Application
GenElute Direct Kit mRNA试剂盒提供了简便程序，用于从之前制备的总RNA或直接从哺乳动物细胞和组织中分离聚腺苷化mRNA。
Features and Benefits
- 40分钟内从总RNA中分离或60分钟内直接从细胞和组织中分离聚(A)+ mRNA
- 寡聚(dT)聚苯乙烯珠需要更少的清洗步骤
- 在10分钟内，在不混合或摇晃的情况下，在oligo(dT)聚苯乙烯珠上捕获mRNA
- 在10分钟内，在不混合或摇晃的情况下，在oligo(dT)聚苯乙烯珠上捕获mRNA（图1）
- 40分钟内从总RNA中分离（图2）或60分钟内直接从细胞和组织中分离（图3）聚(A)+ mRNA
- 寡聚(dT)聚苯乙烯珠需要更少的清洗步骤
Legal Information
GenElute is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC
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仅试剂盒组分
产品编号
说明
- Elution solution 1.5 mL
- Filtration columns with tubes 10 ea
- Lysis solution 20 mL
- 5 M NaCl 1.5 mL
- Oligo(dT)-polystyrene beads .3 mL
- Proteinase K 5 mg
- 40% Glycerol solution .6 mL
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signalword
Danger
hcodes
Hazard Classifications
Eye Irrit. 2 - Met. Corr. 1 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
target_organs
Respiratory system
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
wgk
WGK 3
存储类别
10 - Combustible liquids
法规信息
常规特殊物品
此项目有
实验方案
将RNA逆转录成DNA的方法。使用含有逆转录酶、dNTP、引物、RNase抑制剂和缓冲液的预混试剂。快速合成cDNA。
Method for reverse transcription of RNA into DNA. Uses a premixed reagent that contains reverse transcriptase, dNTPs, primers, RNase inhibitor and buffer. Fast generation of cDNA.